La dialisi

La dialisi è una tecnica che permette di separare diverse molecole in funzione della loro dimensione ed è un processo diffusivo guidato dalla differenza di concentrazione tra campione e dializzato. La separazione di microsoluti da macrosoluti si realizza grazie ad una membrana semipermeabile finché si raggiunge l’equilibrio della specie permeabile.

E’ caratterizzata da condizioni semplici e delicate che la rendono particolarmente attraente quando si devono trattare campioni sensibili e preziosi.

Può adattarsi ad un ampio range di volumi e consente recuperi di prodotto e livelli d’attività che non si possono ottenere con altre tecniche come centrifugazione, ultrafiltrazione o dia-filtrazione.

Le applicazioni tipiche della dialisi sono:

• Rimozione di sali
• Cambio del tampone e regolazione del pH del campione
• Preparazione di proteine diluite prima dell’elettroforesi
• Concentrazione d’anticorpi
• Rimozione di contaminanti
• Studi di legame
• Purificazione d’estratti di coltura tessutale
• Purificazione di proteine, DNA e RNA
• Rimozione di proteine dai gel dopo elettroforesi
• Rimozione d’oligosaccaridi da soluzioni proteiche

Determinazione indiretta della dimensione dei pori della membrana semipermeabile.
Corrisponde al peso molecolare del soluto più piccolo trattenuto al 90% dalla membrana.
La permeabilità di una molecola in realtà dipende dalla sua dimensione, dalla sua forma, dal suo grado d’idratazione e dalla sua carica; inoltre ognuno di questi fattori può essere influenzato dalla natura del solvente, dal suo pH e dalla forza ionica.

Come regola empirica normalmente si sceglie una membrana con MWCO pari alla metà del peso molecolare del soluto da trattenere: ciò dovrebbe rappresentare un buon compromesso tra l’esigenza di avere il massimo recupero del campione da purificare e il minimo tempo richiesto per eseguire la dialisi.

Guida alla scelta delle membrane