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Tecnologia Luminex, strumento e Kit per la determinazione di Citochine e Chemochine.
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Analisi contemporanea di fattori multipli
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Differenziazione immediata Th1/Th2
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Piccoli volumi di campione necessari
(blood preparations, cell culture supernatants, other body fluids)
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Incredibile risparmio di tempo e competitività
Come funziona
La tecnologia si basa su microsfere di polistirolo di 5.6 µm di diametro e con una enorme superficie disponibile per legare l'anticorpo via un gruppo carbossilico. Ogni set di microsfere hanno un colore differente; tale colore viene usato come elemento di differnza tra due letture in fluorescienza (un doppio laser interno "legge" le microsfere che passano in un condotto)
Luminex ha una tecnologia proprietaria che legge le sfere nello spettro del rosso e del infrarosso.
Ogni microsfera di colore differente è legata (coated) con un anticorpo specifico diretto contro l'analita che deve essere misurato. Quindi: |
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vengono combinati ed iniettati nello strumento, dove i lasers illuminano PE sulla superficie di ogni microsfera. Sono usate 2500 microsfere per pozzetto e vengono analizzati 100 eventi. Non è necessario lavorare in duplicato!
In sostanza:Il luminex non è un cito-fotometro, non lavora in chemiluminescenza ma in fluorescenza su microsfere proprietarie invece che sulle cellule.
Non è un FRET (Fluorescent Resonance Energy Transfer) dato che misura l'intensità di fluorescenza direttamente.
La sensibilità, che pero' dipende dal saggio, si puo' definire come 1000 florocromi di phycoerythrin per microsfera.
Ci sono a disposizione 100 colori diversi di microsfere, ogni set ha due "tinture" e ci sono 10 intensità di rosso e 10 di infrarosso; per esempio il primo set potrebbe avere il 95% di rosso e il 5% di infrarosso, il set seguente il 90% di rosso e il 10% di infrarosso.
Per la conservazione delle microsfere bisogna fare attenzione alla luce (sono fotosensibili), agli sbalzi di temperatura. Devono essere conservate a 2-8° al buio.La lunghezza d'onda per l'eccitazione è di 532 nm. Ci sono due laser, uno per classificare e l'altro per quantizzare. Non esiste il problema dell'unbound, dato che il sistema esclude tutto il background nella lettura. La lettura esclude anche le letture di aggregati di microsfere (eventuali). Tutto ciò che non ha dimensione 5,6 micron viene escluso.
Vantaggi
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All-in-one reactions risparmio sul tempo, sui reagenti e guadagno in competitività
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Uno strumento solo per: acidi nucleici, antigene-anticorpo, enzimi e interazione recettore-ligando
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Cinetica rapida che riduce il tempo di incubazione
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Flusso velocissimo (20,000 microsphere al secondo) che taglia i tempi di analisi
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Formati omogenei che eliminano i lavaggi
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Multi-analyte format che permette di prendere decisioni rapide sulla strada da intraprendere
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Piccole quantità di campioni da usarsi
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Non è radioattivo
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Western blot capabilities senza i gels e i possibili errori umani
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