| OSSIDO NITRICO
Le reazioni che coinvolgono l'Ossido Nitrico (NO) sono fondamentali nel processo dei radicali liberi perchè reagisce con questi (e soprattutto con i superossido) per produrre i perossinitriti, molecole iper-reattive.
I perossinitriti in seguito reagiscono con la tirosina delle proteine cellulari, convertendola in nitroso-tirosina; Questa nitrazione porta a modificazione nel comportamento della funzione della proteina. Il Prof Joseph Beckman,
(departments of anesthesiology and biochemistry at the University of Alabama
in Birmingham) ha prodotto anticorpi che riconoscono le proteine che hanno
subito nitrazione e ha collegato queste proteine a patologie come ALS, HD, e aterosclerosis (J.S. Beckman et al., Biological Chemistry Hoppe-Seyler,
375:81-8, 1994) o almeno ha collegato la presenza di queste proteine in
tessuti di individui affetti da queste patologie.
L'NO reagisce anche con i tioli delle proteine, formando gli S-nitrosotioli (SNOs), che dimostrano una funzione regolatoria delle proteine e forniscono anche nuove funzioni ad alcune proteine. Una ricerca del prof. Jonathan Stamler, (associate professor of medicine at Duke University) ha recentemente dimostrato che gli SNOs sono i maggiori regolatori dello scambio gassoso e della pressione sangui (L. Jia et al., Nature, 380:221-6, 1996). Anche la codifica genetica delle proteine sembra essere regolata in parte dagli SNOs (A. Hausladen et al., Cell, 86:719-29, 1996).
L'eccesso di NO cellulare provoca il "nitrosative stress" (parole coniate dal Prof. Stamler) dato che l'NO diventa una tossina che compete con l'ossigeno.L'NO è prodotto in tracce nelle cellule neuronali, endoteliali, neutrofili e probabilmente anche in altri tipi; agisce come secondo messaggero. Il prodotto finale di NO in vivo sono i nitriti (NO2– ) e i nitrati (NO3– ). Le percentuali di questi due composti sono però variabili a seconda del contesto.
KITs Ossido Nitrico
Metodo enzimatico Nitrate Reductase - Cadmio ed enzimatico
Codice catalogo 22110 enzimatico
Codice catalogo 22111 non enzimatico (Cadmio)
Il kit fornisce reagenti per la determinazione dei nitriti come indicatore di produzione di ossido nitrico in campioni biologici. l'NO è rapidamente convertito a nitrito e nitrato in soluzione acquose ossigenate. Utilizzando il reagente di Greiss (reagente colorimetrico) per la determinazione dei nitriti, è comune utilizzare una riduzione chimica o enzimatica per convertire tutti i nitrati in nitriti e misurare poi i nitriti totali come indicatore di produzione di NO. Questo kit è basato su una riduzione enzimatica:
Nitrati -----Nitrate Reductase------NitritiNitrati -----Cadmio------Nitriti
Una analisi spettrofotometrica dei nitriti utilizzando il reagente di greiss completa la procedura.
Analisi quantitativa della attività NOS non radioattivo
Codice catalogo: 22113 (colorimetrico)
Il miglior indice per valutare l'NO totale è la somma di [ NO2– ] e [ NO3– ].
Il Kit colorimetrico per la valutazione della NOS può essere usato per determinare i nitrati e i nitriti nelle urine, nel plasma, nel siero, e in culture celluari. Nei sistemi biologici, l'NO è sintetizzato dalla L-arginina mediante l'azione della NOS (Nitric Oxide Syntetase); NADPH è un cofattore essenziale per questo enzima e quindi non è possibile utilizzare il reagente di Greiss dato che l'NADPH interferisce. L'unico modo per utilizzarlo è distruggere il coenzima (il kit utilizza LDH Lactate dehydrogenase) oppure si possono utilizzare piccole quantità di NADPH con un sistema che ripristini l'equilibrio NADP+--NADPH
Requirements: Urine, plasma, serum or tissue homogenates
Contenuto del Kit
- Assay buffer
- Nitrate reductase
- Cofactors preparation
- Nitrate standard
- Lactate dehydrogenase LDH
- Greiss reagent R1
- Greiss reagent R2
- NADPH
- Microtiter plate
- Plate cover
|
